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            產品資料

            人封閉蛋白5(CLDN5)試劑盒

            如果您對該產品感興趣的話,可以
            產品名稱: 人封閉蛋白5(CLDN5)試劑盒
            產品型號: CLDN5
            產品展商: ELISA試劑盒
            產品文檔: 無相關文檔

            簡單介紹

            人封閉蛋白5(CLDN5)試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗人CLDN5抗體包被于酶標板上,實驗時樣品或標準品中的人CLDN5與包被抗體結合,游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人CLDN5抗體和辣根過氧化物酶標記的親和素??谷薈LDN5抗體與結合在包被抗體上的人CLDN5結合、生物素與親和素特異性結合而形成**復合物,游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB),TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現藍色,加終止液后變成黃色。用酶標儀在450nm波長處測OD值,人封閉蛋白5(CLDN5)試劑盒濃度與OD450值之間呈正比,通過繪制標準曲線計算出樣品中人CLDN5的濃度。


            人封閉蛋白5(CLDN5)試劑盒  的詳細介紹


            人封閉蛋白5(CLDN5)試劑盒

            使用說明書

            人封閉蛋白5(CLDN5)試劑盒基本原理:

            本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗人CLDN5抗體包被于酶標板上,實驗時樣品或標準品中的人CLDN5與包被抗體結合,游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人CLDN5抗體和辣根過氧化物酶標記的親和素??谷薈LDN5抗體與結合在包被抗體上的人CLDN5結合、生物素與親和素特異性結合而形成**復合物,游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB),TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現藍色,加終止液后變成黃色。用酶標儀在450nm波長處測OD值,人CLDN5濃度與OD450值之間呈正比,通過繪制標準曲線計算出樣品中人CLDN5的濃度。

            人封閉蛋白5(CLDN5)試劑盒描述:

            英文名稱 Human CLDN5 (Claudin 5) ELISA Kit
            中文名稱 人封閉蛋白5(CLDN5)酶聯**吸附測定試劑盒
            貨號 X-EL-H1630c 種屬 Human/人
            規格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
            檢測方法 雙抗體夾心法
            檢測范圍 0.156~10ng/mL 靈敏度 0.094ng/mL

            試劑盒組成:

            中文名稱

            英文名稱

            規格

            保存

              ELISA酶標板(可拆卸)

              Micro ELISA  Plate(Dismountable)

              8×12 / 8×6*

            4/-20 #

            凍干標準品

            Reference Standard

              2/1 *

            4/-20 #

            標準品&樣品稀釋液

            Reference Standard & Sample Diluent

              1 20mL/12mL*

            4

            濃縮生物素化抗體

            Concentrated Biotinylated Detection Ab

              1 120μL/70μL*

            4/-20 #

            生物素化抗體稀釋液

            Biotinytated Detection Ab Diluent

              1 10mL/6mL*

            4

            濃縮HRP酶結合物

            Concentrated HRP Conjugate

              1 120μL/70μL*

            4(避光)

            酶結合物稀釋液

            HRP Conjugate Diluent

              1 10mL/6mL*

            4

            濃縮洗滌液(25×

            ConcentratedWashBuffer (25×)

              1 30mL/16mL*

            4

            底物溶液(TMB

            Substrate Reagent

              1 10mL/6mL*

            4(避光)

            反應終止液

            Stop Solution

              1 10mL/6mL*

            4

            封板覆膜

            Plate Sealer

              5/3 *

             

            產品說明書

            Product  Description

              1 

             

            質檢報告

            Certificate of Analysis

              1 

             

            特別說明
            *: [96T/48T](打開包裝后請及時檢查所有物品是否齊全完整)
            #: 
            一周內使用可存于4℃,需長時間存放或多次使用建議存于-20.                                      

            人封閉蛋白5(CLDN5)試劑盒檢測前準備工作:

            1. 請提前20分鐘從冰箱中取出試劑盒,平衡至室溫。

            2. 將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:25)。未用完的放回4℃。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結晶,屬于正?,F象,可用40℃水浴微加熱使結晶完全溶解后再配制洗滌液(加熱溫度不要超過50℃,使用時洗滌液應為室溫)。當日使用。

            3. 標準品10000×g離心1分鐘,加入標準品&樣品稀釋液1.0mL至凍干標準品中,旋緊管蓋,靜置10分鐘,上下顛倒數次,待其充分溶解后,用移液器將其輕輕混勻(濃度為8000pg/mL)。然后根據需要進行倍比稀釋(注:不要直接在反應孔中進行倍比稀釋)。建議配制成以下濃度:按照稀釋方法圖例 標準品&樣品稀釋液直接作為空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL標準品:取0.5mL10ng/mL的上述標準品加入含有0.5mL標準品&樣品稀釋液的EP管中,混勻即可,其余濃度依此類推。 

            4. 生物素化抗體工作液:實驗前計算當次實驗所需用量(以100μL/孔計),實際配制時應多配制100-200μL。使用前15分鐘,以生物素化抗體稀釋液稀釋濃縮生物素化抗體(1:100)成工作濃度。當日使用。

            5. 酶結合物工作液:實驗前計算當次實驗所需用量(以100μL/孔計),實際配制時應多配制100-200μL。使用前15分鐘,以酶結合物稀釋液稀釋濃縮HRP酶結合物(1:100)成工作濃度。

            當日使用。

            人封閉蛋白5(CLDN5)試劑盒標準品稀釋方法圖例:(以500μL/管為例,也可根據實際用量來稀釋,如200μL/管)

                        

            1. 在各孔中加入標準品或樣品各100μL, 37℃孵育90分鐘

            2. 加入100μ生物素化抗體工作液,37℃孵育60分鐘

            3. 洗滌3

            4. 加入100μL酶結合物工作液, 37℃孵育30分鐘

            5. 洗滌5

            6. 加入90μL底物溶液, 37℃孵育15分鐘左右

            7. 加入50μL終止液,立即在450nm波長處測量OD

            8. 結果計算

            一、操作因素對ELISA結果的影響ELISA操作步驟復雜,操作不當將引起較大的誤差。以下敘述各個步驟中的影響因素。

            1.加樣

            2.溫育

            3.洗滌

            4.顯色

            5.比色

            二、灰區的設置通常情況下,ELISA定性實驗以“陽性”和“陰性”來報告結果,兩者間有一條分界線被稱為“陽性判斷值”(cut-off value,CO值),這是定性**測定結果報告的依據。

            三、標本復查ELISA手工檢測過程復雜,影響因素較多,即使室內質控在控,也可能因孔間差異而造成結果的差異,因此加大復查力度是保證結果準確性的可靠方法,比如對HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等項目的可疑、弱陽性標本及少見模式的檢測結果進行復查。

            四、結果判斷和報告常用下列幾種方法表示結果:

            1.定性測定

            2.半定量測定 結果一般以滴度表示。

            3.定量測定 即用已知量的標準品作一系列稀釋后進行ELISA測定,繪制標準曲線,結果以**量或單位表示。在ELISA定量檢測中每一塊反應板都必須繪制相應的標準曲線。

            注意事項:

            仔細閱讀說明書。

            檢查試劑盒標簽上的有效期。如果超過有效期,請勿使用。

            按說明書確定所有試劑齊全(數量、體積)。

            標本制備要規范,每份標本體積要按2-3個復孔以上的量制備(貯存),盡量分裝做備份。短期內無法實驗者,注意低溫保存。

            準備好所有實驗額外所需物品,(比如移液器,試管,清洗器,酶標儀)。

            按說明書將所用試劑平衡至室溫,根據檢測標本數量確定所需試劑的量。

            檢查試劑盒內每種試劑的貯存條件,保證所有試劑均按照試劑盒內說明書推薦的條件存儲。

            檢查不穩定或者變質的試劑溶液(比如沉淀或變色)。有些試劑,比如標準品稀釋液或者檢測稀釋液,可能在設計時就含有沉淀物。所有試劑在滴入酶標板之前,必需充分混勻。而由于沉淀物的特性,在加入酶標板之前,必需不停攪拌。

            保證充分的孵育時間和溫度。

            切勿使用不同生產批號的試劑取代現有試劑或混合現有試劑。

            在混合或溶解蛋白溶液時,避免泡沫產生。

            在實驗開始之前,安排好實驗流程。

            在實驗開始之前,清潔工作臺。

            若有問題,應與我公司或代理商的技術支持聯系

            人封閉蛋白5(CLDN5)試劑盒結果判斷:

            1. 每個標準品的OD值減去空白孔的OD值后作圖,如設置復孔,則應取其平均值計算。以標準品的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,繪出標準曲線。亦可以OD值為橫坐標,標準品的濃度為縱坐標,繪出標準曲線。

            2. 推薦使用專業的曲線制作軟件,如curve expert 1.31.4,在軟件界面既可根據樣品OD值,由標準曲線查出相應的濃度,乘以稀釋倍數;亦可將樣品的OD值代入標準曲線的擬合方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。

            3. 若樣品OD值高于標準曲線上限,應適當稀釋后重測,計算濃度時應乘以稀釋倍數。 

            封閉蛋白5(CLDN5)試劑盒有效期穩定性考察

            本試驗以封閉蛋白5(CLDN5)為例

            1.        OD值:

            正常保存條件下有效期內和超過有效期2個月所測OD值比較

            正常有效期內OD值: 3.251,2.845,2.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

            超過2個月有效期OD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

            2.回收率:分別于定值血清及血漿中加入一定量的封閉蛋白5(CLDN5)標準品,重復測定并計算其品均值,回收率為測定值與理論值的比率。

                    正常保存條件下有效期內和過有效期2個月elisa 試劑盒回收率檢測結果

            Sample

            Conditions

            Recovery range(%)

            Average(%)

            Serum(n=6)

            normal

            88-106

            95

            After 12 month

            80-100

            87

            EDTA plasma(n=6)

            normal

            88-106

            97

            After 12 month

            78-98

            87

             

            3.       線性:分別于定值血清及血漿中加入一定量的封閉蛋白5(CLDN5)標準品,并將標本按1:2,1:4,1:8稀釋,線性范圍即為稀釋后樣本中封閉蛋白5(CLDN5)含量的測定值與理論值的比率。

                     正常保存條件下有效期內和過有效期2個月elisa 試劑盒回線性檢測結果

            Sample

            Conditions

            1:2

            1:4

            1:8

            Serum(n=6)

            normal

            81-92%

            85-90%

            89-105%

            After 12month

            80-88%

            82-87%

            87-101%

            EDTA plasma(n=6)

            normal

            93-104%

            81-97%

            91-96%

            After 12month

            82-95%

            75-82%

            74-90%

             

            4.        精密度:以樣品測定值的變異系數CV表示。CV%=SD/meanx100

            批內差:取同一批次試劑盒對低值,中值和高值樣本進行定量檢測,每份樣本測定20次,分別計算不同濃度樣本的平均值和SD值。

            批間差:選取 3 個不同批次的試劑盒分別對低、中、高值定值樣本進行定量測定, 每個樣本使用同一試劑盒重復測定 8 次,分別計算不同濃度樣本的平均值及 SD 值。(批內差: CV<10%;批間差: CV<11%)

                   正常保存條件下有效期內和過有效期2個月elisa 試劑盒回精密度檢測結果

                                Intra-assay precision

            Conditions

            normal

            After 12month

            normal

            After 12month

            normal

            After 12month

            sample

            1

            1

            2

            2

            3

            3

            n

            20

            20

            20

            20

            20

            20

            Mean(ng/ml)

            16.68

            14.22

            70.25

            62.36

            369.75

            327.88

            SD

            1.08

            1.25

            4.21

            5.31

            24.69

            32.87

            CV(%)

            6.5

            8.8

            6.0

            8.5

            6.6

            10

             

            Conditions

            normal

            After 12month

            normal

            After 12month

            normal

            After 12month

            Sample

            1

            1

            2

            2

            3

            3

            n

            20

            20

            20

            20

            20

            20

            Mean(ng/ml)

            18.72

            13.68

            65.98

            61.25

            387.22

            425.26

            SD

            1.45

            1.52

            4.83

            5.18

            28.49

            36.87

            CV%

            7.7

            11.1

            7.3

            8.5

            7.3

            8.7

            人封閉蛋白5(CLDN5)試劑盒會出現的問題及解決辦法:

            1. 加入反應終止液后,沒有吸光值或吸光值偏低。

            a.原因:未加入酶標記物。

            解決辦法:請按照操作步驟進行。

            b.原因:試劑盒內容物未能充分回。

            解決辦法:確定試劑盒內容物回溫后再進行操作。

            c.原因:室溫太低。

            解決辦法:若室溫太低(<19),請于操作步驟4,適當延長溫育時間。

            d.原因:未使用試劑盒的清洗液清洗。

            解決辦法: 請用試劑盒內所提供的清洗液清洗。

            e.原因:試劑盒已過有效期限。

            解決辦法:請更換成仍在有效期限內的試劑盒。

            2. 標準曲線線性不佳,或是平行性不好。

            a.原因:溫育位置避光不好或受到氣流干擾。

            解決辦法: 請確認溫育位置既不透光也不透風(如抽屜內)。

            b.原因:操作時間拖太久。

            解決辦法:請在方法熟練后再進行操作。

            c.原因:微孔間相互污染。

            解決辦法: 加樣品時,請小心勿濺出微孔外,以免造成其它微孔的污染。

            d.原因:標準品或酶標記物所加入的量不一致。

            解決辦法:請使用已校正過的移液槍,并確保其與吸頭之間有高度密合性。

            e.原因:添加樣品或試劑的操作方法不正確。

            解決辦法:加樣品或試劑時,吸頭請勿接觸微孔。

            f.原因:洗板過程發生問題(如管路堵塞、洗完板后未立刻進行下一步驟)。

            解決辦法:請隨時監控洗板機洗板過程,洗完后立即進行下一步驟。

            3. 吸光值均偏高(或線性不夠陡)。

            a.原因:室溫太高(>25)。

            解決辦法: 若無法降低室內溫度,請適當縮短步驟4的溫育時間。

            b.原因:底物溶液受到污染。

            解決辦法: 若發現底物溶液已呈現淡藍色,請不要再使用。

            c.原因:反應時間超過太久。

            解決辦法:請控制反應時間。

            d.原因:酶標記物污染了盒內其它試劑。

            解決辦法:使用過的吸頭應立即丟棄,可避免試劑間相互污染,凡是試劑(特別是酶標記物與底物溶液)接觸過的容器應立即清洗干凈。(先以漂白水浸泡,再以清水沖洗干凈,可確保無殘留)

            4. 陰性標準品的吸光值低于陽性標準品的吸光值。

            a.原因:微孔中的試劑未能充分混合。

            解決辦法: 試劑加完后,需輕敲盤四周使其充分混合均勻。

            b.原因:洗板過程發生問題(2-f.)。

            解決辦法:請參考2-f.

            c.原因:添加樣品或酶標記物的量不一致。

            解決辦法: 請參考2-d.

             

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